DURAClone IF Bazofil Aktivasyon Testi Protokolü
Bu protokol yalnızca referans amaçlıdır. Yöntemi belirli araştırma ihtiyaçlarına uyarlamak gerekebilir.
Malzemeler
KİT KUTUSU İÇERİĞİ
DURAClone IF Bazofil Aktivasyonu Antikor Paneli için 25 test
NOT: Reaktif tüplerini buzdolabında saklamayın, tüplere dondurma/çözdürme işlemi uygulamayın. Özellikle edinme öncesinde numunenin/numunelerin işlenmesi ve inkübasyonu sırasında tüplerin ışığa maruz kalmasını en aza indirin.
GEREKLİ OLAN ANCAK SAĞLANMAYAN MALZEME
Antikoagülan, EDTA içeren kan toplama tüpü
Kalibre edilmiş pipetler
Vorteks mikser
Antijenler
Fosfat Tamponlu Salin, PBS. Kullanmadan önce Kullanma Talimatlarına göre hazırlanmıştır. (Parça Numarası 6603369)
Calcium2+ Aktivasyon Çözeltisi (Parça Numarası C23407)
OptiLyse C Parçalama Çözeltisi (Parça Numarası A11894)
Aşağıdaki lazerler ve dedektörlerle donatılmış akış sitometrisi:
- FSC/SSC
- 405 nm: 430 – 470 nm, 530 – 570 nm
- 488 nm: 560 – 600 nm
- 633 nm: 715 – 735 nm
Kılıf sıvısı
Akış sitometrisi kalibrasyon boncukları
Boyama İşlemi
YIKAMA PROSEDÜRÜ YOK
- Alerjen seyreltmelerini aktivasyon çözeltisinde hazırlayın.
- Her tüpe 50 μL Aktivasyon Çözeltisi (alerjenli veya alerjensiz) ekleyin.
- Yüksek hızda 6 ila 8 saniye vorteksleyin.
- 50 μl kan ekleyin.
- Her tüpü 1 ila 2 saniye boyunca yavaşça vorteksleyin ve 37 °C su banyosunda 15 dakika inkübe edin. Işıktan koruyun.
- Tüpleri su banyosundan çıkarın ve çeker ocağın altına 250 μL OptiLyse C ekleyin ve hemen 1 ila 2 saniye boyunca vorteksleyin (tamamlanmamış lizisi önlemek için tüpten tüpe ilerleyin).
- 10 dakika boyunca 18 ila 25 °C’de santrifüjleyin. Işıktan koruyun.
- 250 μL 1X PBS ekleyin ve hemen 1 ila 2 saniye vorteksleyin.
- 10 dakika boyunca 18 ila 25 °C’de santrifüjleyin. Işıktan koruyun.
- Numune analize hazırdır.
İSTEĞE BAĞLI YIKAMA ADIMI
- 1. adımdan 9. adıma kadar normal şekilde ilerleyin ve ardından 3 mL 1X PBS ekleyin.
- Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 300 x g’da santrifüjleyin.
- Üst fazı aspire edin.
- Hücreleri %0,1 formaldehit ile 500 μL PBS'de yeniden süspanse edin.
- Numune analize hazırdır.
