Tüm fikse edilebilir canlılık boyaları, proteinler üzerindeki primer aminlere çapraz bağlanan NHS ester ile aktive olan fonksiyonel gruplara dayanmaktadır.  Hidroliz, çapraz bağlama reaksiyonuyla rekabet eder, etiketleme reaksiyonunun etkinliğini azaltır.  Bu hidroliz reaksiyonu pH ve sıcaklığa bağlıdır.  Reaktif grubunun yarı ömrü 4 °C'de pH 8,6'da 10 dakika kadar kısa olabilir.  Bu, sulu çözeltilerde boyanın kısa bir süre boyunca inert hale getirilerek boyamanın azaltılması anlamına gelir.

Ayrıca, stok çözeltideki su buharı reaktifin performansını olumsuz etkileyerek boyamayı azaltabilir.  Boyama azaldığında gerçekte ölü olan daha fazla hücre canlı görünür. Bu nedenle, reaktifler tipik olarak DMSO'da sulandırılır, -80 °C'de saklanır ve tek kullanım için küçük hacimlerde alikotlanır.  Tutarlı sonuçlar elde etmek için boyama işlemlerinin dikkatli bir şekilde zamanlanması gerekir.

ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyaları, NHS ester reaktif grupları kullanmaz.  Kimyalar hidrolize tabi değildir ve bu da standart test işlemlerinde daha sağlam performansa yol açar.

Boyamadan 2 ila 24 Saat Sonra Sonuçlar. Jurkat hücrelerinin ve ısı stresi uygulanmış (10 dakika boyunca 55 °C) Jurkat hücrelerinin bir karışımı, belirtilen ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyası ile boyanmıştır.  Numuneler hemen ve boyamadan 2 saat (s = 4) veya 24 saat (s = 3) sonra edinilmiştir.  Sıfır zaman noktasının yüzdesi olarak ölü hücre popülasyonu grafiklenir.  Hata çubukları kopyalar arasındaki ortalama varyasyonu temsil eder.  2 saatteki hasta alımı 0 zaman noktasının %98-100'üdür ve 24 saatteki hasta alımı 0 zaman noktasının %91-103'üdür.