ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyası Boyama Protokolü

Malzemeler

  • PBS
  • Fetal Sığır Serumu
  • PerFix-nc Reaktifi 1, 2 ve 3 (Parça Numarası B10825)
  • %0,5 formaldehit içeren PBS

Hücre Dizileri

  1. 5 x 106 hücre/mL'de hücre dizilerini kullanın, test başına 100 μL (test başına 5 x 105 hücre)
  2. 2,5 uL* ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyası ekleyin
  3. Vorteksleyin
  4. Işıktan korunmuş şekilde, 18-25°C’de 20 dakika inkübe edin
  5. 3 mL 1x PBS ekleyin
  6. 5 dakika boyunca 300xg’de santrifüjleyin
  7. Üst fazı aspire edin
  8. 500 μL 1x PBS /%0,5 formaldehit ekleyin
  9. Akış sitometrisi kullanarak veri elde edin

*Diğer protokoller ve/veya numunelerle kullanıma yönelik olarak optimum dozu belirlemek için ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyasının titrasyonu önerilir.

Tipik Hücre Dizisi Boyaması ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyaları

ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyaları Kullanarak Örnek Boyama. Karışım uygulanmamış hücrelerin (Canlı Hücreler) ve ısıl işlem görmüş Jurkat hücrelerinin (Ölü Hücreler) boyanmasının iki parametreli görünümü (Yan saçılım ile Floresan yoğunluğu karşılaştırması). Okuma, CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I Serisi akış sitometrisi ile yapılmış olup, belirtilen bant geçirici filtresiyle emisyon tespit edilmiştir. ViaKrome 405 Boya; Mor lazer (405 nm), panel A ile, ViaKrome 561 Boya; Sarı Yeşil lazer (561 nm), panel B ile, ViaKrome 638 Boya Kırmızı lazer (638 nm), panel C ile ve ViaKrome 808 Kızılötesi lazer (808 nm), panel D ile uyarılmıştır.

Periferik Kan Mononükleer Hücreleri (PBMC'ler)

  1. 10 x 106 hücre/mL’de 50 μL PBMC’lere 2,5 μL ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyası ekleyin
  2. Vorteksleyin
  3. Işıktan korunmuş şekilde, 18-25°C’de 20 dakika inkübe edin
  4. 3 mL 1x PBS ekleyin
  5. 5 dakika boyunca 150x g’de santrifüjleyin. Üst fazı aspirasyonla alın
  6. 50 μL Fetal Bovin serum ekleyin. Pelet ayrılıncaya kadar vorteksleyin.
  7. İntraselüler Boyama ile Devam Edin

*Diğer protokoller ve/veya numunelerle kullanıma yönelik olarak optimum dozu belirlemek için ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyasının titrasyonu önerilir.

Tipik PBMC Boyaması ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyaları

ViaKrome Sabitlenebilir Canlılık Boyaları Kullanarak Örnek Boyama. Periferik kan mononükleer hücrelerinin (PMBC) boyanmasının iki parametreli temsiligörünümü. Mor lazer (405 nm), panel A ile, ViaKrome 561 Boya; Sarı Yeşil lazer (561 nm), panel B ile, ViaKrome 638 Boya Kırmızı lazer (638 nm), panel C ile ve ViaKrome 808 Kızılötesi lazer (808 nm), panel D ile uyarılmıştır.

 

Faydalı Bağlantılar