DAPI Canlılık Boyası

4’,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI), çift sarmallı DNA'ya bağlanan ve DNA molekülünün küçük oluğundaki AT kümeleriyle ilişkilendirildiği görünen mavi floresan nükleik asit boyasıdır. DAPI, DNA ile ilişkili olduğunda floresanda yaklaşık 20 kat gelişme gösterir ve maksimum 358 nm eksitasyon ve maksimum 461 nm emisyon değerine sahiptir. DAPI'nin spektral özellikleri, ultraviyole veya mor lazerle donatılmış bir akış sitometrisinde canlılığı saptamak için oldukça uygun hale getirir. DAPI, geçirgen olmayan bir DNA boyasıdır; uygun plazma membranları tarafından canlı hücrelerin büyük ölçüde dışında tutulur, ancak boyanın hücredeki DNA ile etkileşime girebileceği riskli bir membrana girebilir. Önerilen koşullar altında, ölü hücreler mor lazerle uyarıldığında ve 425-475 nm dalga boyu aralığında saptandığında parlak floresan sinyal üretir. Diğer lazer hatlarıyla uyarılan boyalarla kolayca kullanılabilir. Apoptotik, nekrotik hücreler ve/veya hasarlı hücreler, canlı hücrelerin akış sitometrisi ile analizinde enterferans kaynağıdır. Canlı hücreler boyanmamış (negatif) olarak kaldığında, canlı olmayan hücreler DAPI pozitif etiketlemesi sonrasında değerlendirilebilir ve ayırt edilebilir.